Page 150 - 《广西植物》2020年第5期
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７ ４ ６ 广 西 植 物 ４０ 卷
１.２ 方法
表 １ 柠檬样品信息表
１.２.１ 色谱条件 色谱柱:Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ￣Ｃ１８
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｍｏｎ ｓａｍｐｌｅｓ
(２５０ ｍｍ × ４.６ ｍｍꎬ ５ μｍ)ꎻ流动相:０.１％磷酸水
产地 品种 编码 采收期 溶液(Ａ) －乙腈( Ｂ)ꎻ梯度洗脱:１０％ ~ ５０％ Ｂ(０ ~
Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ａｒｅａ Ｖａｒｉｅｔｙ Ｃｏｄｅ Ｈａｒｖｅｓｔ ｔｉｍｅ
１０ ｍｉｎ)ꎬ５０％ ~ ６０％ Ｂ(１０ ~ ２０ ｍｉｎ)ꎬ６０％ ~ ９０％ Ｂ
四川安岳 尤力克 ＥＵＲ＿Ｃ ２０１５－１０－２２
(２０ ~ ２５ ｍｉｎ)ꎬ９０％ ~ １０％ Ｂ( ２５ ~ ３５ ｍｉｎꎬ１０％ Ｂ
Ａｎｙｕｅꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｅｕｒｅｋａ
￣１
云南瑞丽 尤力克 ＥＵＲ＿Ｄ ２０１５－０８－３１ (３５ ~ ４０ ｍｉｎ)ꎻ流速:１.０ ｍＬｍｉｎ ꎻ检测波长:２１０
Ｒｕｉｌｉꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ｅｕｒｅｋａ
ｎｍꎻ柱温:３０ ℃ ꎻ进样体积:１０ μＬꎮ
广东河源 尤力克 ＥＵＲ＿Ｙ ２０１５－０９－１８ １.２.２ 对照品溶液制备 精确称量对照品柠檬苦
Ｈｅｙｕａｎꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｅｕｒｅｋａ
素 ２.８３ ｍｇ、诺米林 ２.５４ ｍｇꎬ分别用 ８０％丙酮溶解
广东连南 无核柠檬 Ｓ＿ＮＭ ２０１５－０９－２１
到 １０ ｍＬ 容量瓶中ꎬ超声使其充分溶解ꎬ定容ꎬ配
Ｌｉａｎｎａｎꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｓｅｅｄｌｅｓｓ ｌｅｍｏｎ
四川安岳 热那亚 ＲＮＹ ２０１５－１０－２２ 成 ２８３ ｍｇＬ 柠檬苦素和 ２５４ ｍｇＬ 对照品储
￣１
￣１
Ａｎｙｕｅꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｇｅｎｏａ
备液ꎮ 吸取适量对照品储备液采用梯度稀释法配
重庆北碚 里斯本 ＬＳＢ ２０１５－１０－３０
Ｂｅｉｂｅｉꎬ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｌｉｓｂｏｎ
制了系列质量浓度的混合标准溶液ꎮ
重庆北碚 北京柠檬 Ｍ＿ＮＭ ２０１５－１０－３０ １.２.３ 供试品溶液制备 用定量滤纸包好冷冻干
Ｂｅｉｂｅｉꎬ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｙｅｒ ｌｅｍｏｎ
燥后的果皮样品ꎬ用石油醚(６０ ~ ９０ ℃ ) 在索氏提
重庆北碚 粗柠檬 Ｒ＿ＮＭ ２０１５－１０－３０
Ｂｅｉｂｅｉꎬ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｒｏｕｇｈ ｌｅｍｏｎ
取器内彻底脱脂 ２４ ｈꎬ将脱脂样品置于干燥器中ꎬ
待石油醚(６０ ~ ９０ ℃ ) 完全挥发ꎬ样品干燥后取出
备用ꎮ 称取 ０.５ ｇ 上述粉末ꎬ置具塞锥形瓶中ꎬ加
入 ８０％ 丙 酮 溶 液 １０ ｍＬꎬ 称 重ꎬ 超 声 ( ８０ Ｗꎬ ４０
ｋＨｚꎬ５０ ℃ )１.５ ｈꎬ冷却后用 ８０％ 丙酮补重ꎮ ０.２２
μｍ 微孔滤膜过滤ꎬ收集滤液备用ꎮ
２ 结果与分析
２.１ ＨＰＬＣ 色谱结果
图 １ 柠檬苦素和诺米林的化学结构式
混合对照品与 ＥＵＲ＿Ｃ 供试品溶液的 ＨＰＬＣ 色
Ｆｉｇ. １ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｌｉｍｏｎｉｎ ａｎｄ ｎｏｍｉｌｉｎ
谱图详见图 ２ꎮ 在 １.２.１ 条件下ꎬ柠檬苦素和诺米林
分离度均大于 １.８ꎬ分离效果极佳ꎬ目标峰对称性好ꎮ
Ｓｈｉｍａｄｚｕ 公司)ꎻＬＧＪ￣１２ 冷冻干燥机( 北京松源华
２.２ 标准曲线的建立
兴科技发展有限公司)ꎻＳＢ￣６００ＤＴＤ 超声波清洗机
在 １.２.１ 条件下ꎬ平行测定各质量浓度按１.２.２
(宁波新芝生物科技股份有限公司)ꎻＵＰＨ￣Ⅱ￣２０Ｔ
制备的混合对照品溶液 ３ 次ꎬ取其峰面积平均值ꎬ
超纯水机( 四川沃特尔水处理设备有限公司)ꎻ索 以对照品质量浓度为 Ｘ 坐标ꎬ平均峰面积为 Ｙ 坐
氏提取器ꎮ 标ꎬ绘制标准曲线ꎮ 结果显示柠檬苦素和诺米林
对照品柠檬苦素( 批号 ＭＵＳＴ￣１３０２１６０６)、诺 在一定质量浓度范围内与相应峰面积之间线性关
米林(批号 ＭＵＳＴ￣１２０７２１０１)购自成都曼思特生物 系良好(表 ２)ꎮ
科技有限公司ꎬ化学结构式如图 １ 所示ꎬ各标准品 ２.３ 方法学考察
纯度均满 足 定 量 检 测 需 求ꎻ 乙 腈 ( 色 谱 纯ꎬ 美 国 ２.３.１ 精密度试验 在 １.２.１ 条件下ꎬ重复测定 ６
Ｆｉｓｈｅｒ 公司)ꎻ磷酸、丙酮和石油醚(６０ ~ ９０ ℃) (均 次按 １.２.２ 制备的混合对照品储备液ꎬ结果显示柠
为分析纯)购自成都科龙化工试剂厂ꎻ自制超纯水ꎮ 檬苦素和诺米林平均峰面积的 ＲＳＤ 分别为０.８８％、
