Page 168 - 《广西植物》2020年第9期

９ 期 李亚军等: 黑老虎叶总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究 １ ３ ８ ３

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(ｍｇｍＬ )为横坐标制作标准曲线:ｙ ＝ ４.５４１ １ｘ＋
１ 材料与方法 ０.００２ ６ꎬＲ ＝ ０.９９９ ３ꎮ
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１.２.３ 总黄酮含量的测定和计算 准确量取 １.２.１ 中
１.１ 材料、试剂和仪器、设备 黑老虎叶总黄酮样品溶液 １ ｍＬꎬ 按照 １.２.２ 方法测
１.１.１ 材料 黑老虎叶:５ 月份采摘于湖南环境生 定样品溶液吸光度ꎬ将测定所得吸光度代入标准曲
物职业技术学院林下种植基地内ꎬ经湖南环境生 线计算出测试溶液总黄酮浓度 Ｃ( ｍｇｍＬ )ꎮ 按
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物职业技术学院医药技术学院杨军衡副教授鉴定 照下式计算总黄酮提取率(％):提取率 ＝ Ｃ ´Ｎ ´Ｖ ´

为五味子科(Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ)南五味子属 ( Ｋａｄｓｕｒａ １０ ¸ｍ ´１００％ꎮ 式中:Ｖ 为提取液体积(ｍＬ)ꎻＮ 为
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Ｊｕｓｓｉｅｕ)植物黑老虎(Ｋａｄｓｕｒａ ｃｏｃｃｉｎｅａ)ꎮ 稀释倍数ꎻｍ 为黑老虎叶粉末重量(ｇ)ꎮ
１.１.２ 试剂 芦丁标准品(纯度≥９８ ％):北京普析 １.２.４ 单因素试验和正交优化试验 按照 １.２.１ 的
科 技 有 限 公 司ꎮ １ꎬ １￣二 苯 基￣２￣三 硝 基 苯 肼 方法ꎬ在其他因素一定的情况下ꎬ分别以不同提取
(ＤＰＰＨ)、维 生 素 Ｃ、乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 ( ＥＤＴＡ￣ 时间 ( １５、 ２５、 ３５、 ４５、 ５５ ｍｉｎ)、 乙 醇 浓 度 ( ４０％、

２Ｎａ)、盐酸、双氧水、水杨酸、９５％乙醇、亚硝酸钠、 ５０％、６０％、７０％、８０％)、提取温度(４０、５０、６０、７０、
硝酸铝、邻苯三酚、石油醚、氢氧化钠等试剂都为 ８０ ℃ )和料液比(１ ∶ １０、１ ∶ １５、１ ∶ ２０、１ ∶ ２５ 、１ ∶

分析纯ꎬ购于国药集团化学试剂有限公司ꎮ ３０ ｇｍＬ )进行单因素试验ꎮ
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１.１.３ 仪器和设备 ＵＶ￣２６００ 紫外可见分光光度计 根据单因素试验结果ꎬ选择提取时间( Ａ)、乙
(上海百贺仪器科技有限公司)ꎻＫＱ￣５２００Ｅ 超声波
醇浓度(Ｂ)、提取温度(Ｃ)、料液比( Ｄ) 为自变量ꎬ
清洗仪(长沙天恒仪器有限公司)ꎻＸＢ￣０.３ 真空旋 以黑 老 虎 叶 总 黄 酮 提 取 率 为 评 价 指 标ꎬ 采 用
转浓缩仪( 上沈阳乐华生物制药设备有限公司)ꎻ Ｌ (３ )正交试验优化黑老虎叶总黄酮提取工艺参
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ＦＡ １２４ 万分之一电子分析天平( 湖南轩彩科学仪
数ꎬ正交试验因素水平如表 １ 所示ꎮ
器有限公司)ꎻＤＨＧ￣９０００￣ ９０３０Ａ 电热恒温鼓风干
燥箱(长沙天恒仪器有限公司)ꎮ 表 １ 正交试验因素水平表
１.２ 方法 Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｌｅｖｅｌ ｇｒａｐｈ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
１.２.１ 黑老虎叶中总黄酮的提取 黑老虎叶采摘 Ｄ
Ａ Ｂ Ｃ
后洗净ꎬ６０ ℃ 下烘干至恒重ꎬ粉碎后过 ６０ 目筛即 水平 提取时间 乙醇浓度 提取温度 料液比
Ｅｔｈａｎｏｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｓｏｌｉｄ￣ｌｉｑｕｉｄ
Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
得黑老虎叶粉末ꎮ 精确称取黑老虎叶粉末 ２.０ ｇꎬ (ｍｉｎ) ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｒａｔｉｏ
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(％) (℃ ) (ｇｍＬ )
石油醚脱脂ꎬ滤渣在超声功率为 ２５０ Ｗꎬ在一定提
１ ２５ ６０ ５０ １ ∶ １５
取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比条件下进行
２ ３５ ７０ ６０ １ ∶ ２０
超声辅助提取ꎬ提取液减压浓缩ꎬ７０％乙醇定容于
３ ４５ ８０ ７０ １ ∶ ２５
１００ ｍＬ 容量瓶中ꎬ得黑老虎叶总黄酮样品溶液ꎮ
１.２. ２ 芦 丁 标 准 曲 线 的 制 备 采 用 ＮａＮＯ －
２
Ａｌ(ＮＯ ) －ＮａＯＨ 法(梁志远等ꎬ２０１６)制备芦丁标 １.２.５ 黑老虎叶总黄酮抗氧化试验 在最优条件
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准曲线ꎮ 准确称取干燥好的芦丁 ５０ ｍｇꎬ用 ７０％乙 下提取得到的黑老虎叶总黄酮按照以下方法进行
醇溶解并定容于 ５０ ｍＬ 容量瓶中ꎮ 准确量取芦丁 抗氧化活性试验测试ꎮ

样品溶液 ０、０.２、０.４、０.６、０.８、１.０ ｍＬ 于 ２５ ｍＬ 容 １.２.５.１ 黑老虎叶总黄酮对 ＤＰＰＨ 清除能力的测试
量瓶中ꎬ分别依次加入 ０.８ ｍＬ ５％ ＮａＮＯ 与 １０％ 参照庞玉新等(２０１５) 的方法ꎬ将最优条件下提
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Ａｌ(ＮＯ) ꎬ每加入一次试剂室温下反应 ５ ｍｉｎꎬ然后 取的黑老虎叶总黄酮溶解于 ７０％乙醇配制成不同
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再加入 １０ ｍＬ １ ｍｏｌＬ ＮａＯＨ 后用 ７０％乙醇定容 浓度 ( ０. ０２５、０. ０５、０. ０７５、０. １、０. ２、０. ４、０. ６、０. ８
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至刻度ꎬ室温下反应 １５ ｍｉｎꎬ在 ５１０ ｎｍ 处测定吸 ｍｇｍＬ )的样品溶液ꎬ分别取以上样品溶液 １.０
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光度ꎬ以吸光度( Ａ) 为纵坐 标ꎬ芦 丁 溶 液 浓 度 Ｃ ｍＬꎬ加入 ２.５ ｍＬ 一定浓度的 ＤＰＰＨ 溶液ꎬ反应半