Page 59 - 《广西植物》2024年第2期
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2 期                    李童等: 绣球‘杜丽’AP3 基因克隆与基因编辑载体构建                                         2 6 1

                                             表 1  本研究中所使用的引物序列
                                          Table 1  Primer sequences used in this study
                                                                      退火温度
              引物名称                      序列 (5′→3′)                                          用途
                                                                  Annealing temperature
             Primer name               Sequence (5′→3′)                                    Purpose
                                                                        (℃ )
              HmAP3 ̄F1          5′ ̄ ATGTTCTCCACTACCAACAAACT  ̄3′                         HmAP3 全长扩增
                                                                         56
              HmAP3 ̄R1         5′ ̄ CTAATCGAGCAATGCATACGTAG  ̄3′                      HmAP3 full ̄length amplification
                                5′ ̄ ACAGCTAGAGTCGAAGTAGTGATTG
              HmAP3 ̄F2  GATCTGTACCAGACGACAATGTTTTAGAGCTAGAAATAGC  ̄3′               CRISPR / Cas9 载体构建 ̄靶点 1
                                                                         58
              HmAP3 ̄R2         5′ ̄ TTCTGCAGACAAATGGCCCCCATTCG                   CRISPR / Cas9 vector construction ̄Target 1
                                     GAGTTTTTGTATCT  ̄3′
                                5′ ̄ ACAGCTAGAGTCGAAGTAGTGATTG
              HmAP3 ̄F3   GTACTCGATACTTTCGTTCAGTTTTAGAGCTAGAAATAGC  ̄3′              CRISPR / Cas9 载体构建 ̄靶点 2
                                                                         58
              HmAP3 ̄R3         5′ ̄ TTCTGCAGACAAATGGCCCCCATTCG                   CRISPR / Cas9 vector construction ̄Target 2
                                     GAGTTTTTGTATCT  ̄3′
               Cas9 ̄F            5′ ̄ CAAGTTCATCAAGCCCATCC  ̄3′                         抗性芽 Cas9 序列检测
                                                                         52
               Cas9 ̄R            5′ ̄ GTCCTCGTTTTCCTCATTGTC  ̄3′                   Cas9 sequence detection in resistant buds











































             ∗表示终止子ꎮ
             ∗ indicates terminator.
                                            图 1  HmAP3 的序列及其结构域分析
                                     Fig. 1  Sequence and structural domain analysis of HmAP3


            黏性末端的目的片段ꎬ与线性载体连接ꎬ用大肠杆                             所示ꎮ 绣球对潮霉素敏感性很高ꎬ经 2 mgL 潮
                                                                                                          ̄1
            菌转化后挑取单菌落测序ꎬ测序结果表明目的片                              霉素筛选后ꎬ在侵染约 2 000 枚叶片后仅培育出 9
            段已成功插入载体ꎬ插入片段与载体结构如图 5                             株抗性芽(图 6:A)ꎮ 以抗性芽叶片 DNA 为模板ꎬ
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