Page 59 - 《广西植物》2024年第2期
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2 期 李童等: 绣球‘杜丽’AP3 基因克隆与基因编辑载体构建 2 6 1
表 1 本研究中所使用的引物序列
Table 1 Primer sequences used in this study
退火温度
引物名称 序列 (5′→3′) 用途
Annealing temperature
Primer name Sequence (5′→3′) Purpose
(℃ )
HmAP3 ̄F1 5′ ̄ ATGTTCTCCACTACCAACAAACT  ̄3′ HmAP3 全长扩增
56
HmAP3 ̄R1 5′ ̄ CTAATCGAGCAATGCATACGTAG  ̄3′ HmAP3 full ̄length amplification
5′ ̄ ACAGCTAGAGTCGAAGTAGTGATTG
HmAP3 ̄F2 GATCTGTACCAGACGACAATGTTTTAGAGCTAGAAATAGC  ̄3′ CRISPR / Cas9 载体构建 ̄靶点 1
58
HmAP3 ̄R2 5′ ̄ TTCTGCAGACAAATGGCCCCCATTCG CRISPR / Cas9 vector construction ̄Target 1
GAGTTTTTGTATCT  ̄3′
5′ ̄ ACAGCTAGAGTCGAAGTAGTGATTG
HmAP3 ̄F3 GTACTCGATACTTTCGTTCAGTTTTAGAGCTAGAAATAGC  ̄3′ CRISPR / Cas9 载体构建 ̄靶点 2
58
HmAP3 ̄R3 5′ ̄ TTCTGCAGACAAATGGCCCCCATTCG CRISPR / Cas9 vector construction ̄Target 2
GAGTTTTTGTATCT  ̄3′
Cas9 ̄F 5′ ̄ CAAGTTCATCAAGCCCATCC  ̄3′ 抗性芽 Cas9 序列检测
52
Cas9 ̄R 5′ ̄ GTCCTCGTTTTCCTCATTGTC  ̄3′ Cas9 sequence detection in resistant buds
∗表示终止子ꎮ
∗ indicates terminator.
图 1 HmAP3 的序列及其结构域分析
Fig. 1 Sequence and structural domain analysis of HmAP3
黏性末端的目的片段ꎬ与线性载体连接ꎬ用大肠杆 所示ꎮ 绣球对潮霉素敏感性很高ꎬ经 2 mgL 潮
 ̄1
菌转化后挑取单菌落测序ꎬ测序结果表明目的片 霉素筛选后ꎬ在侵染约 2 000 枚叶片后仅培育出 9
段已成功插入载体ꎬ插入片段与载体结构如图 5 株抗性芽(图 6:A)ꎮ 以抗性芽叶片 DNA 为模板ꎬ