Page 47 - 《广西植物》2025年第10期
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１０ 期 周浪等: 大果木姜子果实倍半萜类成分及生物活性研究 １ ７ ７ ７
乙酸乙酯部分 (Ｆｒ.Ｂ) 采用 ２００ ~ ３００ 目硅胶 的浓度接种于 ９６ 孔板ꎬ每孔 ２００ μＬꎬ置于 ３７ ℃ 、
进行柱色谱分离ꎬ以石油醚 ∶ 乙酸乙酯(８ ∶ １ → ５％ ＣＯ 的恒温培养箱孵化 ４ ｄꎬ取出ꎬ用 ＭＫ￣８０１
２
０ ∶ １ꎬ Ｖ / Ｖ) 进 行 梯 度 洗 脱ꎬ 得 到 流 分 Ｆｒ. Ｂ１ － 和所筛选化合物处理细胞 ２４ ｈꎬ再加入 ＮＭＤＡ (终
Ｆｒ.Ｂ８ꎮ Ｆｒ.Ｂ(１) 经硅胶柱色谱分离ꎬ以纯石油醚 浓度为 ２ ｍｍｏｌＬ ) 损伤 ６ ｈꎬ处理后加入终浓度
￣１
洗脱ꎬ得到化合物 ２９ (４ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.Ｂ３ 部分选用中 为 ０.５ ｍｇｍＬ 的 ＭＴＴꎬ继续于 ３７ ℃ 孵化 ４ ｈ 后ꎬ
￣１
压 Ｃ￣１８ 反 相 材 料 分 离 ( ４０％ → ７０％ 甲 醇 － 水ꎬ 取出ꎬ用 １００ μＬ 二甲基亚砜代替培养液ꎮ 利用酶
Ｖ / Ｖ)ꎻ分成 ４ 个亚组分ꎬ为 Ｆｒ.Ｂ(３) －(４０％、５０％、 标仪测量 ４９０ ｎｍ 处的吸光度ꎮ
６０％、７０％)ꎻＦｒ.Ｂ(３) －(４０％) 经半制备 ＨＰＬＣ 分 ２.３ 测定 １５ 个化合物的 α￣葡萄糖糖苷酶抑制活性
离( ４５％ 甲醇 － 水ꎬ２ ｍＬｍｉｎ )ꎬ得到化合物 ２１ 参考 Ｇｏｕ 等(２０２１)的方法ꎬ测定化合物 １、４、
￣１
(３５ ｍｇꎬ ｔ ＝ ２４.４ ｍｉｎ)ꎮ Ｆｒ.Ｂ５ 部分选用中压 Ｃ￣ ５、８－１６、２１、２７、２８ 的 α￣葡萄糖糖苷酶抑制活性ꎮ
Ｒ
１８ 反相材料分离(４０％ →７０％甲醇－水ꎬ Ｖ / Ｖ)ꎻ分 向 ９６ 孔板中加入 ２５ μＬ 不同浓度的样品和 ５０ μＬ
￣１
成 ４ 个 亚 组 分ꎬ 为 Ｆｒ. Ｂ ( ５) － ( ４０％、５０％、６０％、 的 α￣葡萄糖苷酶(０.２ ＵｍＬ )ꎬ于 ３７ ℃ 下预培养
７０％)ꎬＦｒ. Ｂ ( ５) － ( ５０％) 经 半 制 备 ＨＰＬＣ 分 离 １０ ｍｉｎꎬ再加入 ２５ μＬ 浓度为 ５ ｍｍｏｌＬ ｐ￣ＮＰＧꎬ
￣１
￣１
(６５％甲醇－水ꎬ ２ ｍＬｍｉｎ )ꎬ得到化合物 ２７ (５ 将反应混合物在 ３７ ℃ 孵育 ５ ｍｉｎ 后ꎬ加入 １００ μＬ
ｍｇꎬ ｔ ＝ １６.３ ｍｉｎ)ꎻ Ｆｒ. Ｂ( ５) － ( ５０％) 经半制备 Ｎａ ＣＯ 溶液(０.１ ｍｏｌＬ ) 停止反应ꎬ酶标仪测定
￣１
Ｒ ２ ３
ＨＰＬＣ 分离(４８％乙腈－水ꎬ ２ ｍＬｍｉｎ )ꎬ得到化 ４０５ ｎｍ 下的吸光度( Ａ)ꎮ 阿卡波糖为阳性对照
￣１
合物 ２６ (１２ ｍｇꎬ ｔ ＝ ２１.９ ｍｉｎ)、化合物 ２８ ( １６ 组ꎻ所有样品均设置 ３ 个重复ꎬ数据表示为平均
Ｒ
ｍｇꎬ ｔ ＝ ３２.６ ｍｉｎ)ꎻ Ｆｒ. Ｂ( ５) － ( ６０％) 经半制备 值±标准差ꎮ 计算公式如下:
Ｒ
ＨＰＬＣ 分离(７０％乙腈－水ꎬ ２ ｍＬｍｉｎ )ꎬ得到化 Ａ －Ａ Ｂ
￣１
ｓ
抑制率(％)＝ (１－ ) ×１００ꎮ
合物 ４ (８ ｍｇꎬ ｔ ＝ ２８.０ ｍｉｎ)、化合物 ８ (６０ ｍｇꎬ Ａ －Ａ
Ｒ Ｔ Ｃ
ｔ ＝ ３９.４ ｍｉｎ)ꎻＦｒ.Ｂ６ 部分选用中压 Ｃ￣１８ 反相材 式中: Ａ 为被测样品混合溶液的吸光度ꎻ Ａ 为
Ｒ ｓ Ｂ
料分离(４０％ →７０％甲醇 －水ꎬ Ｖ / Ｖ)ꎻ分成 ４ 个亚 空白的吸光度包含不含酶的测试样品( 溶剂代替
组分ꎬ 为 Ｆｒ.Ｂ(６) － ( ４０％、５０％、６０％、７０％)ꎬ Ｆｒ. Ｂ 酶)ꎻ Ａ 为不含样品的含有所有试剂的混合溶液的
Ｔ
(６) －(４０％)经半制备 ＨＰＬＣ 分离(４０％甲醇－水ꎬ 吸光度(溶剂代替样品)ꎻ Ａ 为在没有样品和酶的
Ｃ
￣１
２ ｍＬｍｉｎ )ꎬ得 到 化 合 物 １３ ( ３ ｍｇꎬ ｔ ＝ ２０. ４ 情况下混合溶液的吸光度(溶剂代替样品和酶)ꎮ
Ｒ
ｍｉｎ)ꎻＦｒ.Ｂ(６) －(５０％)经半制备 ＨＰＬＣ 分离(４８％
￣１ ３ 结构鉴定
甲醇 － 水ꎬ ２ ｍＬ ｍｉｎ )ꎬ得 到 化 合 物 １ ( ６ ｍｇꎬ
ｔ ＝ ２３.４ ｍｉｎ)ꎮ Ｆｒ.Ｂ８ 部分选用中压 ＭＣＩ 反相材
Ｒ
料分离 (１５％→９０％甲醇－水ꎬ Ｖ / Ｖ)ꎬ 分成 ５ 个亚 化合物 １ 针状晶体( 甲醇)ꎬＥＳＩ￣ＭＳ ( ｍ / ｚ):
＋ １
组分ꎬ为 Ｆｒ.Ｂ(５) －(１５％、３０％、４０％、６０％、 ９０％)ꎻ ２５７ [Ｍ ＋ Ｎａ] ꎬ分子式为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ (６００
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１５
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Ｆｒ.Ｂ(８) －(９０％) 经半制备 ＨＰＬＣ 分离 (６６％甲醇－ ＭＨｚꎬ ＣＤＣｌ ) δ : ６.２３ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ９.８ Ｈｚꎬ Ｈ￣
３ Ｈ
￣１
水ꎬ ４０ ｍｉｎꎬ ２ ｍＬｍｉｎ )ꎬ 得到化合物 ９ (６ ｍｇꎬ １)ꎬ ６.７５ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ９.７ Ｈｚꎬ Ｈ￣２)ꎬ ２.０４ (１Ｈꎬ
ｔ ＝ ２９.３ ｍｉｎ)、化合物 １８ (６ ｍｇꎬ ｔ ＝ ３１.４ ｍｉｎ)、 ｔꎬ Ｊ ＝ １３.２ Ｈｚꎬ Ｈ￣６ａ)ꎬ ２.９７ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ １３.４
Ｒ Ｒ
化合物 １９ (７ ｍｇꎬ ｔ ＝ ３２.５ ｍｉｎ)、化合物 ２３ (１１ Ｈｚꎬ Ｈ￣６ｂ)ꎬ １.３７ (１Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣７)ꎬ １.６０ (１Ｈꎬ ｍꎬ
Ｒ
ｍｇꎬ ｔ ＝ ３４.１ ｍｉｎ)ꎮ Ｈ￣８ａ)ꎬ １.７９ (１Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣８ｂ)ꎬ １.３０ (１Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣
Ｒ
２.２ ＭＴＴ 法测定 １４ 个化合物对 ＮＭＤＡ 诱导的 ９ａ)ꎬ １.８６ (１Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣９ｂ)ꎬ １.９２ (３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１１)ꎬ
ＰＣ１２ 细胞损伤的保护作用 １.２８ (３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１２)ꎬ １.２９ (３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１３)ꎬ １.２３
￣１ １３
实验 分 组: 对 照 组ꎻ 模 型 组 ( ２ ｍｍｏｌ Ｌ (３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１５)ꎻ Ｃ￣ＮＭＲ(１５０ ＭＨｚꎬ ＣＤＣｌ ) δ :
３ Ｃ
ＮＭＤＡ)ꎻ阳性药组(３０ μｍｏｌＬ ＭＫ８０１)ꎻ药物组 １５６.７ (Ｃ￣１)ꎬ １２６.２ ( Ｃ￣２)ꎬ １８６.７ ( Ｃ￣３)ꎬ １２９.４
￣１
(化合物 １、４、５、８、９、１１、１２、１５、１６、１９、２０、２１、２２、 (Ｃ￣４)ꎬ １６０.７ ( Ｃ￣５)ꎬ ２８.９ ( Ｃ￣６)ꎬ ５０.６ ( Ｃ￣７)ꎬ
￣１
２７ 浓度均为 ３０ μｍｏｌＬ )ꎮ ２２.２ (Ｃ￣８)ꎬ ３８.１ (Ｃ￣９)ꎬ ４０.５ (Ｃ￣１０)ꎬ １０.６ ( Ｃ￣
给药方式:参照 Ｙａｎｇ 等(２０２３) 的方法ꎮ 选取 １１)ꎬ ７２.５ ( Ｃ￣１２)ꎬ ２７.１ ( Ｃ￣１３)ꎬ ２７.９ ( Ｃ￣１４)ꎬ
对数生长期的 ＰＣ１２ 细胞ꎬ以每毫升 ２×１０ 个细胞 ２３.６ ( Ｃ￣１５)ꎮ 以 上 数 据 与 文 献 ( Ｕｅｇａｋｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ
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