Page 62 - 《广西植物》2026年第3期

４ ３ ８ 广 西 植 物 ４６ 卷
１￣１－Ｆｒ. Ｆ￣２￣１￣１１)ꎬ其中 Ｆｒ. Ｆ￣２￣１￣９ 经半制备高效 ０.１％ 的 甲 酸) 分 离 纯 化 得 到 化 合 物 １６ ( ２２. ４
液相 色 谱 ( Ｔｈｅｒｍｏ Ｃ 柱ꎬ ５５％ ~ ９０％ 乙 腈ꎬ ４. ０ ｍｇ)ꎻＦｒ.Ｄ￣２￣２ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱色谱粗分为 ８
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ｍＬｍｉｎ ꎬ３５ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲酸) 分离 个组分 (Ｆｒ.Ｄ￣２￣２￣１－Ｆｒ.Ｄ￣２￣２￣８)ꎬＦｒ.Ｄ￣２￣２￣８ 经半
￣１
纯化得到化合物 ７ (１０.２ ｍｇ)ꎬＦｒ.Ｆ￣２￣１￣１０ 经半制 制备高效液相色谱( Ｓｉｌｇｒｅｅｎ Ｃ 柱ꎬ２８％ ~ ４５％ 乙
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￣１
备高效液相色谱( Ｔｈｅｒｍｏ Ｃ 柱ꎬ５５％ ~ ９０％乙腈ꎬ 腈ꎬ４ ｍＬｍｉｎ ꎬ４５ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲酸)
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￣１ 分离纯化得到化合物 １０ (１３.４ ｍｇ)、１１ (４.５ ｍｇ)、
４.０ ｍＬｍｉｎ ꎬ３５ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲酸)
分离纯化得到化合物 ８ (２.３ ｍｇ)ꎬＦｒ.Ｆ￣２￣１￣８ 经半 １２ (１.２ ｍｇ)ꎮ
制备高效液相色谱( Ｔｈｅｒｍｏ Ｃ 柱ꎬ４１％ ~ ５７％ 乙 １.５ 生物活性测定
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腈ꎬ４.０ ｍＬｍｉｎ ꎬ３５ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲 １.５.１ ＨｅｐＧ２ 细胞培养及其胰岛素抵抗模型的建
￣１
立 使用从中国科学院细胞库购得的 ＨｅｐＧ２ 细胞
酸)分离纯化得到化合物 ９ (５.０ ｍｇ)ꎮ
(目录编号:ＴＣＨｕ７２) 从液氮罐中迅速解冻ꎬ随后
取 Ｆｒ.Ｄ 用正相硅胶柱层析(３００ ~ ４００ 目) 分
离ꎬ按二氯甲烷－甲醇(１００ ∶ １→０ ∶ １)的体系进行 将其置入含有双抗及 １０％胎牛血清的高糖 ＤＭＥＭ
梯 度 洗 脱ꎬ 经 ＴＬＣ 检 测 合 并 分 为 ６ 个 组 分 培养基中ꎬ放置于 ３７ ℃ 、５％ ＣＯ 的恒温培养箱内ꎬ
２
当细胞培养达到 ９０％ 时ꎬ使用 １ μｍｏｌＬ 高浓度
￣１
(Ｆｒ.Ｄ￣１－Ｆｒ.Ｄ￣６)ꎮ Ｆｒ.Ｄ￣３ 经半制备高效液相色谱
胰岛素且不含血清的 ＤＭＥＭ 培养基培养 ４８ ｈꎬ获
￣１
(Ｓｉｌｇｒｅｅｎ Ｃ 柱ꎬ１８％ ~ ３６％ 乙腈ꎬ４ ｍＬｍｉｎ ꎬ２０
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ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲酸) 分离纯化得到化合 得胰岛素抵抗状态的 ＨｅｐＧ２ 细胞ꎮ
１.５.２ 葡萄糖摄取和活性氧的测定 将 ＨｅｐＧ２ 细
物 １３ (５７.８ ｍｇ) 和化合物 １４ (９４.４ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.Ｄ￣１
胞均匀接种于 ９６ 孔板中ꎮ 细胞完全生长后ꎬ用上
经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱色谱粗分为 ５ 个组分( Ｆｒ.Ｄ￣
述方法建立高水平胰岛素诱导的 ＨｅｐＧ２ 细胞胰岛
１￣１－Ｆｒ. Ｄ￣１￣５)ꎬＦｒ. Ｄ￣１￣２ 经半制备高效液相色谱
素抵 抗 ( ＨｅｐＧ２￣ＩＲ) 模 型ꎬ 用 不 同 的 化 合 物 ( ４０
￣１
(Ｓｉｌｇｒｅｅｎ Ｃ 柱ꎬ２２％ ~ ３８％乙腈ꎬ２５ ｍＬｍｉｎ ꎬ３０
１８ μｍｏｌＬ )处理细胞 ４８ ｈ 后ꎬ收集细胞上清液ꎬ用
￣１
ｍｉｎꎬ 流动相含有 ０.１％ 的甲酸) 细分成 ７ 个组分
葡萄糖(ＧＬＵ￣ＯＸ)检测试剂盒进行分析ꎮ
(Ｆｒ.Ｄ￣１￣２￣１－Ｆｒ.Ｄ￣１￣２￣７)ꎬ其中 Ｆｒ.Ｄ￣１￣２￣６ 结晶析
使用活性氧检 测 试 剂 盒 测 定 细 胞 中 的 ＲＯＳ
出为化合物 １７ (１００.５ ｍｇ)ꎬＦｒ.Ｄ￣１￣２￣２ 经半制备
水平ꎮ
高效液相色谱 ( Ｔｈｅｒｍｏ Ｃ 柱ꎬ１５％ ~ ３４％ 乙腈ꎬ４
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１.５.３ 统计学处理 统计分析使用 Ｐｒｉｓｍ ５.０ 软件ꎬ
ｍＬｍｉｎ ꎬ２０ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲酸) 分离
￣１
所有数据均以“平均值±标准差”(ｘ±ｓ)形式呈现ꎻ采
纯化得到化合物 １８ (１８６.４ ｍｇ)ꎬＦｒ.Ｄ￣１￣２￣４ 经半
用单因素方差分析(ＡＮＯＶＡ)进行统计学分析ꎬ标有
制备高效液相色谱( Ｓｉｌｇｒｅｅｎ Ｃ 柱ꎬ１２％ ~ １２％ 乙
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∗的数据被视为具有显著性(Ｐ<０.０５)ꎮ
￣１
腈ꎬ ４ ｍＬｍｉｎ ꎬ ４５ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％的甲
２ 结果与分析
酸)分离纯化得到化合物 １９ (１２.９ ｍｇ)ꎬＦｒ.Ｄ￣１￣２￣
４ 经半制备高效液相色谱( Ｓｉｌｇｒｅｅｎ Ｃ 柱ꎬ１６％ ~
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￣１
１６％乙腈ꎬ９ ｍＬｍｉｎ ꎬ４０ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％ ２.１ 结构鉴定
的甲酸)分离纯化得到化合物 ２０ (９.７ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.Ｄ￣ 利用大孔树脂色谱、正相硅胶柱色谱、半制备
２ 用正相硅胶柱层析(３００ ~ ４００ 目) 分离ꎬ按二氯 型液相色谱等分离技术及 ＮＭＲ、ＭＳ 等现代波谱学
甲烷－甲醇(１００ ∶ １→０ ∶ １)的体系进行梯度洗脱ꎬ 方法从印度獐牙菜全草中分离纯化鉴定出 ２０ 个
经 ＴＬＣ 检测合并分为 ４ 个组分( Ｆｒ.Ｄ￣２￣１－Ｆｒ.Ｄ￣２￣ 单体化合物ꎬ化合物结构鉴定如下(图 １)ꎮ
４)ꎮ Ｆｒ.Ｄ￣２￣３ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱色谱粗分为 １３ 化合物 １ 黄色针晶( 甲醇)ꎻＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ ２９７
＋
１
个组分( Ｆｒ. Ｄ￣２￣３￣１－Ｆｒ. Ｄ￣２￣３￣１３)ꎬ其中 Ｆｒ. Ｄ￣２￣３￣ [Ｍ ＋ Ｎａ] ꎬ其分子式为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎻ Ｈ ＮＭＲ (６００
１４ １０ ６
１０ 经半制备高效液相色谱( Ｔｈｅｒｍｏ Ｃ 柱ꎬ１０％ ~ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ): δ １１.９１ (ｓꎬ １Ｈꎬ １￣ＯＨ)ꎬ １１.０８
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６ Ｈ
￣１
５０％乙腈ꎬ４ ｍＬｍｉｎ ꎬ３０ ｍｉｎꎬ流动相含有 ０.１％ (ｓꎬ １Ｈꎬ ８￣ＯＨ)ꎬ ９.７１ ( ｓꎬ １Ｈꎬ ５￣ＯＨ)ꎬ ７.２６ ( ｄꎬ
的甲酸) 分离纯化得到化合物 １５ (１.０ ｍｇ)ꎬＦｒ.Ｄ￣ Ｊ ＝ ８.８ Ｈｚꎬ １Ｈꎬ Ｈ￣７)ꎬ ６.６４ ( ｄꎬ Ｊ ＝ ８.８ Ｈｚꎬ １Ｈꎬ
２￣３￣１３ 经 半 制 备 高 效 液 相 色 谱 ( Ｓｉｌｇｒｅｅｎ Ｃ 柱ꎬ Ｈ￣６)ꎬ ６.６１ ( ｄꎬ Ｊ ＝ ２.０ Ｈｚꎬ １Ｈꎬ Ｈ￣４)ꎬ ６.４０ ( ｄꎬ
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１０％ ~ ５０％乙腈ꎬ４ ｍＬｍｉｎ ꎬ３０ ｍｉｎꎬ流动相含有 Ｊ ＝ ２.０ Ｈｚꎬ １Ｈꎬ Ｈ￣２) ꎬ ３.９０ ( ｓꎬ ３Ｈꎬ ３￣ＯＣＨ ) ꎻ
￣１
３