Page 141 - 《广西植物》2020年第5期

５ 期 陆笛等: ‘恭城月柿’不同生育期果实和叶片单宁组分含量的变化 ７ ３ ７

１.２.２ 可溶性单宁的测定 可溶性单宁的测定参
１ 材料与方法 照 Ｔａｉｒａ(１９９６)的方法并做部分改良ꎮ 取 ５ ｇ 果肉
(果皮、柿叶)加入 ８０％的甲醇 ２５ ｍＬꎬ室温下放置
１.１ 材料、试剂和仪器 １０ ｍｉｎꎬ 期 间 摇 动 ３ 次ꎬ 于 温 度 为 ４ ℃ ꎬ 转 速 为
供试材料:广西大学植物标本园栽植的‘恭城 ９ ５００ ｒｓ 条件下离心 ２０ ｍｉｎꎬ重复提取两次ꎬ合
￣１
并提取液ꎬ用 ８０％的甲醇定容至 １００ ｍＬꎮ 样液稀
月柿’ 品种ꎬ分别采摘于 ５ 个时期:幼果期( ２０１７
年 ８ 月 ９ 日)、膨大期(２０１７ 年 ８ 月 ３１ 日)、成熟前 释至 １ ０００ ｍＬꎬ先取稀释后的待测样液 １ ｍＬꎬ加入
６ ｍＬ 蒸馏水ꎻ摇匀后加入 ０.５ ｍＬ １ Ｎ 的福林酚试
期(２０１７ 年 ９ 月 ３０ 日)、成熟期(２０１７ 年 １０ 月 ２８
日)和成熟后期(２０１７ 年 １１ 月 １９ 日)ꎮ 选取大小 剂ꎬ摇匀ꎬ静置 ３ ｍｉｎꎻ然后加入 １ ｍＬ 饱和Ｎａ ＣＯ ３
２
均匀、成熟度一致、无病虫害且无机械损伤的果实 溶液和 １.５ ｍＬ 的蒸馏水ꎬ摇匀ꎻ最后ꎬ避光条件下
和柿叶ꎬ分 ３ 个生物学重复测定其单果重、硬度及 静置 １ ｈꎬ于 ７２５ ｎｍ 处测定吸光值ꎮ

总色差ꎬ同时分离果肉和果皮ꎬ液氮冷冻后保存于 １.２.３ 单宁组分测定 样品制备:提取方法同 １.２.２
－４０ ℃ ꎬ以备后续定量分析ꎮ 方法ꎬ将粗提液浓缩至 １０ ｍＬꎬ取 １ ｍＬ 于 ０. ２２ μｍ
试剂:乙腈ꎬ质谱纯(Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ 公司)ꎻ标 微孔滤膜过滤后装入 ２ ｍＬ 进样瓶备用ꎮ
准品:儿 茶 素 ( ＣＡ)、 表 儿 茶 素 ( ＥＣ)、 没 食 子 酸 色谱 条 件: 色 谱 柱 Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ￣ＢＣＨ Ｃ１８
(ＧＡ)、 没 食 子 儿 茶 素 ( ＧＣ)、 表 没 食 子 儿 茶 素 (１００ ｍｍ × ２. １ ｍｍꎬ０. １８ μｍ)ꎬ 流 速 ０. ２ ｍＬ
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(ＥＧＣ)、芦丁( Ｒｕｔｉｎ)ꎬ含量≥９５％( 北京索莱宝科 ｍｉｎ ꎬ柱温 ３０ ℃ ꎬ二极管阵列检测器( ＡＤＣ) 检测
波长 ２８０ ｎｍꎬ进样量 ２ μＬꎬ梯度洗脱条件见表 １ꎮ
技有限公司)ꎻ其他试剂均为国产分析纯ꎮ
仪器设 备: 质 构 仪 ＴＡ. ＸＴ. Ｐｌｕｓ ( 英 国ꎬ Ｓｔａｂｌｅ
表 １ 梯度洗脱条件
Ｍｉｃｒｏ Ｓｙｓｔｅｍ 公司)ꎻ超高效液相色谱—四级杆串
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎｓ
联飞行时间质谱仪( ＵＰＬＣ￣ＱＴＯＦ) ( 配有可变波长
流动相 Ａ:
紫外检测器 ＡＤＣ 和数据采集与分析软件 Ｍａｓｓｌｙｎｘ ０.１％甲酸水 流动相 Ｂ:乙腈
时间 Ｍｏｖｉｎｇ ｐｈａｓｅ Ｂ:
Ｍｏｖｉｎｇ ｐｈａｓｅ Ａ:
４.１ 工作站ꎬ美国 Ｗａｔｅｒｓ 公司)ꎻ旋转蒸发仪ꎻ分析 Ｔｉｍｅ (ｍｉｎ) Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ｗａｔｅｒ Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ
(％)
(％)
天平ꎻ离心机ꎮ
１.２ 实验方法 ０ ９５ ５
１.２.１ 单果重、硬度、总色差的测定 每个时期果实 ５ ９５ ５
７ ３０ ７０
分 ３ 个生物学重复ꎬ每个生物学重复随机取 １０ 个果
１０ １５ ８５
实ꎬ用百分之一天平称量ꎬ 记录单果重并计算平
１２ １５ ８５
均值ꎮ
１２.１ ９５ ５
硬度的测定选取质构仪 ＴＡ. ＸＴ. Ｐｌｕｓ ( 英 国ꎬ １５ ９５ ５
Ｓｔａｂｌｅ Ｍｉｃｒｏ Ｓｙｓｔｅｍｓ 公司)对果实硬度进行测定ꎬ分
别选取柿果实赤道上相反方向的两个面ꎬ削去果
质谱条件:采用电离子喷雾( ＥＳＩ) 法ꎮ 毛细管
皮ꎬ采用直径为 ５ ｍｍ 的圆柱形探头进行穿刺测定ꎮ
电压 ２.５ ｋＶꎬ锥孔电压 ３０ Ｖꎬ扫描范围 ５０ ~ １ ２００
总色差的测定采用 ＣＲ￣１０ 色差计对果实色差
Ｄａꎬ离子源温度 １００ ℃ ꎬ脱溶剂温度 ３５０ ℃ ꎬ锥孔
进行测定( 日本ꎬＫＯＮＩＣＡ ＭＩＮＯＬＴＡ 公司)ꎬ记录
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气流量 ５０ Ｌｈ ꎬ脱溶剂气流量 ７００ Ｌｈ ꎮ
Ｌ、ａ、ｂ 值ꎬ 计 算 总 色 差 ΔＥ 值ꎮ 计 算 公 式: ΔＥ ＝
标准溶液的配置:称取 ＧＣ、ＥＣ、ＥＧＣ、ＧＡ、ＣＡ、
２ ２ ２
(ΔＬ) ＋(Δａ) ＋(Δｂ) ꎮ 其中ꎬ设幼果期的 Ｌ、ａ、 Ｒｕｔｉｎ 各 １.０ ｍｇ 于 １０ ｍＬ 容量瓶中ꎬ用甲醇溶解并
ｂ 值为标准值ꎬ其他时期的 Ｌ、ａ、ｂ 值为测定值ꎬ测 定容至刻度ꎬ配成标准混合样品储备液ꎮ 使用前将
定值与标准值之差即为 ΔＬ、Δａ、Δｂ 值ꎮ 混合母液用甲醇分别稀释成 ０.２、０.４、０.６、０.８、１.０