Page 75 - 《广西植物》2025年第2期

２ 期 王一谋等: 八角茴香果实化学成分及其抗氧化活性研究 ２ ７ ７

安捷伦 １２６０ 型高效液相色谱仪( 美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公 ＭＣＩ 柱色谱材料拌样后进行梯度洗脱( 甲醇 － 水
司)ꎻ海道夫旋转蒸发仪、Ｈｅｉ￣ＣＨＩＬＬ ６００ 型冷却循 ２０％、４０％、６０％、８０％) 得到 ５ 个流分 Ｆｒ. ５. １ － Ｆｒ.
环 器 ( 德 国 Ｈｅｉｄｏｉｐｈ 公 司 )ꎻ ＭＺ ２Ｃ ＮＴ ＋ ＡＫ ５.５ꎬＦｒ.５.１ 经硅胶柱层析ꎬ半制备液相纯化ꎬ得化
ＳＹＮＣＨＲＯ＋ＥＫ 真空泵(德国 Ｖａｃｕｕｂｒａｎｄ 公司)ꎮ 合物 １(８６.４ ｍｇ)、１１(１６.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.５.３ 经硅胶柱
Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ￣Ｃ 反相柱(９.４ ｍｍ × ２５０ ｍｍꎬ５ 层析ꎬ半制备液相纯化ꎬ得化合物 ７( １８.７ ｍｇ)、８
１８
μｍꎬ美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司)ꎻＧＦ 薄层色谱硅胶、柱色 (１１.０ ｍｇ)、１２ ( ７. ３ ｍｇ)、１４ ( ４. ４ ｍｇ)、１６ ( １０. １
２５４
谱硅胶( 青岛海洋化工厂)ꎻＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 羟丙 ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６(６５.２ ｇ) 用 １００ ~ ２００ 目硅胶拌样后上
基葡聚糖凝胶( 美国 Ｐｈａｒｍａｃｉａ 公司)ꎻＭＣＩ 树脂 硅胶柱层析ꎬ以石油醚－乙酸乙酯(２０ ∶ １→１ ∶ １)

(日本 Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 公司)ꎻＤ１０１ 进行 程 序 洗 脱ꎬ 得 到 ７ 个 组 分 Ｆｒ. ６. １ － Ｆｒ. ６. ７ꎮ
大孔 吸 附 树 脂 ( 天 津 市 大 钧 科 技 有 限 公 司)ꎻ Ｆｒ.６.４ 采用重结晶法进行纯化ꎬ得化合物 ２０(５.３
ＣＤ ＯＤ、 ＤＭＳＯ￣ｄ 、 Ｄ Ｏ ( 美 国 Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ ｇ)ꎬ取部分余下母液经凝胶柱(甲醇) 纯化ꎬ得化合
３ ６ ２
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓꎬ Ｉｎｃ 公司)ꎻＤＰＰＨ(上海梯希爱化成工 物 ２１(３.３ ｍｇ)、２２(２.９ ｍｇ)ꎮ
业发展有限公司)ꎻＶＣ( 广东恒健制药有限公司ꎬ １.３.２ 化合物体外抗氧化活性实验 参照恽祥惠
国药准字 Ｈ４４０２１１７１)ꎻ色谱乙腈( 上海星可高纯 等(２０１４)和聂丽娟等( ２０１５) 的方法ꎬ利用 ９６ 孔
溶剂有限公司)ꎻ实验室所用的常规试剂均为化学 板和酶标仪对八角茴香中的 ２３ 种化合物进行活
纯溶剂(昆明利研科技有限公司)ꎮ 性筛选ꎬ以 ＤＰＰＨ 甲醇溶液作为底物(１５０ μｍｏｌ
１.３ 研究方法 Ｌ )ꎬＶＣ 为阳性对照ꎮ 分为样品组(１６０ μＬ ＤＰＰＨ
￣１
１.３.１ 提取分离 将干燥的八角茴香果实( １４. ３ 溶液＋４０ μＬ 样品ꎬＡ)ꎬ阴性对照组(１６０ μＬ 甲醇＋
ｋｇ)粉碎过一号筛(１０ 目)ꎬ采用 ８５％ 乙醇浸提 ３ ４０ μＬ 样品ꎬＡ )ꎬ空白组(１６０ μＬ ＤＰＰＨ 溶液＋ ４０
０
次和回流提取 ３ 次( 分别为 ２ ｄ、２ ｈ) 及减压浓缩 μＬ 甲醇ꎬＢ)ꎮ
得总提物(５.５ ｋｇ)ꎮ 将总提物加水溶解ꎬ依次用石 对待测样品(１００ μｍｏｌＬ ) 进行初次筛选ꎬ
￣１
油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取 ５ 次ꎬ得到不同极 清除率>５０％的进行再次筛选ꎮ 将需要再次筛选
性部位ꎮ 的样品稀释成 ６ 个浓度的待测溶液ꎬ依次加入 ９６
正丁醇部位(１ ９６９.７ ｇ)经 Ｄ１０１ 大孔树脂( 乙 孔板中ꎬ与底物充分混合ꎮ 室温下于避光环境中
醇－水 ０％、３０％、６０％、９０％) 粗 划 段 得 到 ４ 个 部 放置 ３０ ｍｉｎ 后用酶标仪检测 ５１７ ｎｍ 波长的吸光
位ꎮ ６０％乙醇－水部位(１３３.４ ｇ) 用 １００ ~ ２００ 目硅 度值ꎬ平行 ３ 次ꎬ使用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ 软件计算
胶拌 样 后 上 硅 胶 柱 层 析ꎬ 以 二 氯 甲 烷 － 甲 醇 其 ＩＣ 值ꎮ
５０
计 算 化 合 物 ＤＰＰＨ 自 由 基 清 除 率 的 公 式
(１ ∶ ０→１ ∶ １)程序洗脱得到 ８ 个组分 Ｆｒ.１－Ｆｒ.８ꎮ
Ｆｒ.２(６４.０ ｇ) 经 ＭＣＩ 柱色谱脱色、硅胶柱层析、半 如下:
制备液相纯化ꎬ得化合物 １０( ３２.０ ｍｇ)、１５( ４４.３ 清除率 (％) ＝ [１－(Ａ－Ａ ) / Ｂ] × １００ꎮ
０
ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.３(８.６ ｇ) 经硅胶柱层析、薄层柱层析、半 式中: Ａ 表示待测样品的吸光度ꎻＡ 表示阴性
０
制备液 相 纯 化ꎬ得 化 合 物 ２ ( １００. ４ ｍｇ)、３ ( ２２. ２ 对照的吸光度ꎻＢ 表示空白对照的吸光度ꎮ
ｍｇ)、４(４.５ ｍｇ)、５(５.０ ｍｇ)、６(２.５ ｍｇ)、１３(１.７
ｍｇ)、１８(３７.５ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.４(４９.４ ｇ)经重结晶得到化 ２ 结果与分析
合物 １９(１５.７ ｇ)ꎬ取部分余下母液经凝胶柱( 甲
２.１ 结构鉴定
醇)分离ꎬ半 制 备 液 相 纯 化ꎬ 得 化 合 物 ２３ ( １３４. ４
ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６(１１.５ ｇ) 经重结晶得到化合物 １７(３.３ 化合物 １ 黄色油状物ꎬ分子式为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ
１２
１０
３
１
ｇ)ꎬ余下母液中存在不溶物ꎬ经过滤得到化合物 ９ ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ: ２０３. １ [ Ｍ ＋ Ｎａ ] ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ４００
＋
(３６.０ ｍｇ)ꎮ ＭＨｚꎬＣＤ ＯＤ) δ: ７. ３０ ( ２Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８. ９ Ｈｚꎬ Ｈ￣２′ꎬ
３
乙酸乙酯部位(６０１.５ ｇ)加入等量粗硅胶拌样 ６′)ꎬ６.９３ (２ＨꎬｄꎬＪ ＝ ８.９ ＨｚꎬＨ￣３′ꎬ５′)ꎬ５.１１ (１Ｈꎬ
后上硅胶柱层析ꎬ以石油醚 － 乙酸乙酯 ( １ ∶ ０ → ｓꎬＨ￣１)ꎬ３. ７７ ( ３Ｈꎬｓꎬ４′￣ＯＣＨ )ꎬ２. ０２ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣
３
１ ∶ １)、二氯甲烷－甲醇(１２ ∶ １→１ ∶ １) 进行程序 ３)ꎻ Ｃ￣ＮＭＲ ( １００ ＭＨｚꎬＣＤ ＯＤ) δ: ８０. ６ ( ｄꎬＣ￣
１３
３
洗脱ꎬ得到 ９ 个组分 Ｆｒ.１ －Ｆｒ.９ꎮ Ｆｒ.５(４９.７ ｇ) 用 １)ꎬ２０９. ７ ( ｓꎬ Ｃ￣２)ꎬ２５. ４ ( ｑꎬ Ｃ￣３)ꎬ１３１. ９ ( ｓꎬ Ｃ￣